Cómo calcular las resoluciones de HPLC

Actualizado el 08 de diciembre de 2020

Por Jack Brubaker

Los químicos utilizan la cromatografía líquida de alto rendimiento, o HPLC, para separar mezclas de compuestos. En general, el método consiste en inyectar una muestra en una columna donde se mezcla con uno o más solventes. Diferentes compuestos se adsorben o se “pegan” a la columna en diferentes grados; y a medida que el solvente empuja los compuestos a través de la columna, uno de los componentes de la mezcla saldrá primero de la columna. El instrumento detecta los compuestos a medida que salen de la columna y produce un cromatograma que consta de un gráfico con el tiempo de retención en el eje x y la intensidad de la señal del detector en el eje y. A medida que los compuestos salen de la columna, producen “picos” en el cromatograma. En general, cuanto más separados y estrechos sean los picos del cromatograma, mayor será la resolución. Los científicos consideran que una resolución de 1,0 o superior representa una separación adecuada.

    Mida los anchos de dos picos adyacentes en el cromatograma observando dónde están los valores del eje x en la base de cada pico. El eje x representa el tiempo de retención, generalmente medido en segundos. Así, si un pico comienza en 15,1 segundos y termina en 18,5 segundos, su ancho es (18,5 – 15,1) = 3,4 segundos.

    Determine los tiempos de retención anotando el tiempo, es decir, la ubicación en el eje x, que corresponde a las ubicaciones de los máximos de los picos. Este valor estará normalmente a mitad de camino entre los dos valores usados ​​para calcular el ancho en el paso 1. El ejemplo dado en el paso 1, por ejemplo, exhibiría un máximo de alrededor de 16,8 segundos.

    Calcule la resolución, R, entre dos picos mediante:

    R=\frac{RT_1-RT_2}{0.5(W_1+W_2)}

    donde RT1 y RT2 representan los tiempos de retención de los picos 1 y 2, y W1 y W2 representan los anchos de los picos tomados en sus bases. Continuando con el ejemplo de los pasos 2 y 3, un pico exhibe un tiempo de retención de 16,8 segundos y un ancho de 3,4 segundos. Si el segundo pico exhibiera un tiempo de retención de 21,4 segundos con un ancho de 3,6 segundos, entonces la resolución sería:

    R=\frac{21.4-16.8}{0.5(3.4+3.6)}=1.3

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